El frasco de Agar Mueller Hinton es un medio utilizado para investigar la susceptibilidad de los microorganismos a los antimicrobianos y aislar gonococos. Recomendado para realizar las pruebas de susceptibilidad a agentes antimicrobianos de organismos aeróbicos de crecimiento rápido por el método de difusión en disco. Se seleccionó este medio por una reproducibilidad relativamente buena, la sencillez de su fórmula y la riqueza de los datos experimentales que habían sido acumulados utilizando este medio.
El procedimiento Kirby-Bauer se basa en la difusión de sustancias antimicrobianas en agar que se impregnan sobre discos de papel. En el medio el nitrógeno, las vitaminas, el carbono y los aminoácidos son aportados por la Infusión de carne y la Peptona de caseína H. El almidón es agregado para absorber cualquier metabolito tóxico. El agar bacteriológico es adicionado como agente solidificante.
El medio presenta bajo contenido en timina y timidina inhibidores de sulfonamidas y trimetoprim, esto permite un crecimiento satisfactorio de la mayoría de los patógenos.
Método
Suspender 38 gramos del medio en un litro de agua purificada. Mezclar bien y calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50°C y vaciar en placas de Petri estériles.
Procedimiento
1. Inocular las placas estriando con un hispo impregnado previamente con una suspensión de un cultivo reciente del microorganismo indicado, ajustando al estándar de turbidez de 0.5 de Mc Farland o ajustar de 0.08 a 0.1 de absorbancia a 625nm.
2. Colocar sobre el agar ejerciendo una ligera presión, los discos impregnados con los antibióticos indicado con ayuda de pinzas estériles o dispensador.
3. Incubar las placas en posición invertida durante 24 h a una temperatura de 35 + 2°C en atmósfera de aproximadamente 5 –10 % de CO2.
