Agar Bilis y Rojo Violeta es un medio selectivo utilizado en la identificación y cuenta de coliformes presentes en el agua, leche y otros materiales de importancia sanitaria, las colonias de coliformes presentan una morfología típica que permite su identificación presuntiva y que debe ser confirmada mediante reacciones bioquímicas.
El grupo de bacterias coliformes incluye bacilos Gram negativos aerobios y anaerobios facultativos no esporulados, que fermentan la lactosa y forman ácido y gas a 35°C de 24 a 48 horas.
Los coliformes resisten la presencia de bilis en el medio de cultivo; cuando se desarrollan en este medio, el ácido producido por la fermentación de lactosa ocasiona el vire del indicador rojo neutro y la precipitación de las sales biliares, por lo que las colonias son color rojo obscuro y generalmente están rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas de color rojo claro a rosa, y la posibilidad de contar las colonias se fundamenta en su dispersión y separación.
Método
Suspender 41.5 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. No sobrecalentar. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C, vaciar en placas de Petri estériles y usar inmediatamente. También se puede esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.
Procedimiento
1. Colocar una alícuota de 1.0 mL de la muestra en una placa de Petri estéril.
2. Adicionar 15 mL del medio enfriado a una temperatura de 45-50°C y mezclar suavemente.
3. Permitir que el medio solidifique y adicionar 4 mL del medio enfriado a una temperatura de 45-50°C.
4. Permitir que el medio solidifique e incubar a 35 ± 2°C durante 18 a 24 horas. Se recomienda la incubación a 32°C para muestras de productos lácteos.
5. Examinar las colonias de color rojo a púrpura, de 0.5 mm de diámetro (o más grande) que se rodean por un halo con precipitado de ácidos biliares.
